PCR引物設(shè)計的十個基本原則：1、引物zuì好在模板cDNA的保守區(qū)內(nèi)設(shè)計：DNA序列的保守區(qū)是通過物種間相似序列的比較確定的。搜索不同物種的同一基因，通過序列分析軟件比對，各基因相同的序列就是該基因的保守區(qū)。2、引物長度一般在15~30堿基之間：引物長度(primerlength)常用的是18-27bp，但不應(yīng)大于38，因為過長會導(dǎo)致其延伸溫度大于74℃，不適于TaqDNA聚合酶進行反應(yīng)。3、引物GC含量在40%~60%之間，Tm值zuì好接近72℃：上下游引物的Tm值是寡...

循環(huán)次數(shù)：一般為25a～30次。循環(huán)數(shù)決定PCR擴增的產(chǎn)量。模板初始濃度低，可增加循環(huán)數(shù)以便達到有效的擴增量。但循環(huán)數(shù)并不是可以無限增加的。一般循環(huán)數(shù)為30個左右，循環(huán)數(shù)超過30個以后，DNA聚合酶活性逐漸達到飽和，產(chǎn)物的量不再隨循環(huán)數(shù)的增加而增加，出現(xiàn)了所謂的“平臺期"。循環(huán)參數(shù)如下:1.預(yù)變性模板DNA*變性與PCR酶的*激活對PCR能否成功至關(guān)重要，建議加熱時間參考試劑說明書，一般未修飾的Taq酶激活時間為兩分鐘。2.變性步驟循環(huán)中一般95℃，30秒足以使各種靶DNA序...

樣品采集：1、食品樣品：樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照菌檢驗要求進行。2、血液樣品：用無菌注射器抽取受檢者靜脈血2mL，注入無菌EDTA2Na(或檸檬酸鈉)抗凝管，立即混勻。3、糞便樣品：取糞便置于滅菌的收集管中送檢。4、病灶部位樣品：取發(fā)病部位新鮮滲出物、粘液膿血送檢。稀釋PCR陽性對照（以10E2-10E7拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例）使用方法：1.注意：由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）...

試驗結(jié)果空白背景高，這是什么原因造成的?試驗結(jié)果空白背景高，常見原因如下：a)可能原因：洗板不干凈;解決方法：充分洗滌，che底拍干;洗板要防止交叉污染;濃縮洗液準確配制;吸嘴盡可能一次性使用;加樣或加酶拍板的濾紙應(yīng)棄去不用，不要反復(fù)使用，否則易造成污染。b)可能原因：顯色液變質(zhì)或者試劑過期;解決方法：檢查試劑盒有效期。c)可能原因：試劑稀釋有誤，如加酶的濃度過高;解決方法：請按說明書所示稀釋倍數(shù)配制;d)可能原因：蒸餾水受酶等污染;解決方法：使用新鮮蒸餾水;e)可能原因：試...

ELISA試劑盒的五大種類:一、生物原裝ELISA試劑盒以及各類國產(chǎn)ELISA試劑盒、細胞因子檢測試劑盒如白介素、選擇素、集落刺激因子，腫瘤壞死因子，干擾素，轉(zhuǎn)化生長因子，趨化因子，細胞因子受體，粘附分子，生長因子，凋亡因子等。二、食品安全檢驗ELISA試劑盒指食品中的激素、藥物、霉菌毒素、過敏原殘留、轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品的檢測試劑盒，以及微生物、維生素等的檢測產(chǎn)品。包括植物病毒、細菌、真菌、植物激素和轉(zhuǎn)基因作物的農(nóng)業(yè)診斷試劑盒，以及動植物疾病診斷類如豬、牛、羊、馬等家畜和禽類以及寵物...

人間充質(zhì)干細胞無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)條件：1、合適的小鼠源細胞培養(yǎng)基是體外細胞生長增殖的重要的條件之一，培養(yǎng)基不僅提供細胞營養(yǎng)和促使細胞生長增殖的基礎(chǔ)物質(zhì)，而且還提供培養(yǎng)細胞生長和繁殖的生存環(huán)境。2、優(yōu)質(zhì)血清目前，大多數(shù)合成培養(yǎng)基都需要添加血清。血清是細胞培養(yǎng)液中重要的成分之一，含有細胞生長所需的多種生長因子及其它營養(yǎng)成分。3、無菌無毒細胞培養(yǎng)環(huán)境無菌無毒的操作環(huán)境和培養(yǎng)環(huán)境是保證細胞在體外培養(yǎng)成功的首要條件。在體外培養(yǎng)的細胞由于缺乏對微生物和有毒物的防御能力，一旦被微生物或有毒物...

聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)（Polymerasechainraction,PCR）是一種在體外擴增特定DNA片段的方法，具有特異、敏感、產(chǎn)率高、快速、簡便、重復(fù)性好、易自動化等突出優(yōu)點，可用很短時間使目的基因或某一片段擴增十萬乃至幾百萬倍。PCR反應(yīng)基本步驟：1、變性：根據(jù)DNA高溫變性的原理，將反應(yīng)體系溫度升至變性溫度（高于模板熔點，約95℃），使目的DNA雙鏈裂解成PCR模板（單鏈）。[95℃，30s]2、退火：將反應(yīng)體系溫度驟降至退火溫度（低于引物熔點約55℃），是PCR引物與P...

影響抗原抗體反應(yīng)的兩個因素：1、反應(yīng)物自身的因素抗體：不同來源的抗體,反應(yīng)性各有差異,抗體的濃度、特異性和親和力都影響抗體抗原反應(yīng),為提高試驗的可靠性,應(yīng)選擇高特異性、高親和力的抗體作診斷試劑.等價帶的寬窄也影響抗原抗體復(fù)合物的形成,單克隆抗體不適用于沉淀反應(yīng).抗原：抗原的理化性狀、分子量、抗原決定簇的種類及數(shù)目均可影響反應(yīng)結(jié)果.顆粒性抗原出現(xiàn)凝集反應(yīng),可溶性抗原出現(xiàn)沉淀反應(yīng),單價抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合不出現(xiàn)沉淀現(xiàn)象.2、反應(yīng)環(huán)境條件酸堿度：抗原抗體反應(yīng)必須在合適的pH環(huán)境中進行...

在培養(yǎng)細胞的實驗中，難免培養(yǎng)的細胞被污染了，得不到想要的實驗結(jié)果，那么你知道細胞培養(yǎng)的污染來源有哪些嗎？細胞培養(yǎng)過程中污染的來源主要有以下幾條途徑：一、不潔的動物組織標本很多動物組織本該是無菌的(直接與外界相通的呼吸道和消化道、泌尿系統(tǒng)除外)，但由于取材時不小心也會有污染的機會。組織本身含有細菌，如取材時不用濃的抗生素洗液洗滌浸泡，也會帶菌，造成細胞污染。二、空氣空氣中含有大量的微生物，如果操作室與外界隔離不嚴或消毒不充分下，很容易造成污染。另外，凈化工作臺使用過久，濾板未定...

抗體保存溫度和條件抗體的保存方法一般會直接影響抗體的活性和使用效果。在保存得當?shù)那闆r下，大部分抗體可以存放數(shù)月甚至數(shù)年，一般情況需嚴格按照抗體說明書來進行保存?？贵w保存溫度和條件:1、抗體收到后，需在12000rpm離心1~5分鐘，再打開管蓋進行分裝和保存，如果抗體體積不足50ul，可延長離心時間至5分鐘，從而確保抗體全部離心下來。2、對于多數(shù)抗體而言，分裝成小等份并凍存于-20℃或-80℃是zuijia選擇。腹水形式的產(chǎn)品收到后需立即凍存，因為該類產(chǎn)品含有大量的蛋白酶，長期...